微血管内皮细胞的培养和纯化通过应用微血管内皮细胞生长因子和免疫磁珠技术,变得更加简单。
微血管内皮细胞的培养方法如下:
骨骼肌、心脏、大脑、胃、视网膜、肺、皮肤、脉络膜、小肠、脂肪、肝窦、肾、关节滑膜、胎盘、骨髓、胰岛、角膜、食道等器官组织的微血管内皮细胞已成功培养的人体主要器官和组织。
微血管内皮细胞分布在血管壁上,有助于血管生成、凝血、淋巴细胞运输和炎症反应等各种生物过程。这些细胞多种多样,具有特定的细胞特征和功能,这取决于它们存在的器官或组织。脂肪组织是特殊的,因为它可以在整个生命阶段持续生长。因此,它具有高水平的血管生成能力,以确保脂肪组织得到充分的血液供应。研究表明,在脂肪生成之前发生血管生成,这意味着微血管内皮细胞对前脂肪细胞的增殖有影响。同时,微血管内皮细胞和表皮细胞之间的组织在细胞之间有过度生长
分离微血管内皮细胞
当前主要有三种方法可以分离内皮细胞,即酶消化、机械分离和磁珠分离。
酶消化法的优点是可以获得更多分离的细胞,纯度更高,但缺点是酶会破坏一些蛋白质。消化后,需要用血清停止酶的活性,通过使用目金属筛去除未消化的组织,得到组织悬液。
机械性分离法和磁珠分离法,可减少酶对内皮细胞的伤害,但可引起其它细胞污染。
磁珠分离法是一种以具有特异性单克隆抗体的磁珠为介质,将内皮细胞从其它细胞中分离出来的方法。尽管该方法适用于分离可用于炎症研究的微血管内皮细胞,但分离的细胞数量较少。
机械性分离法是一种用于分离大血管内皮细胞的方法,它能避免酶对内皮细胞的损伤,而且不会对其它细胞造成污染。
第三,微血管内皮细胞的净化过程是将具有内皮细胞特征的细胞从混合的细胞群中筛选出来,并将其分离出来进行净化的内皮细胞。这个过程通常包括离体组织、细胞粘附、细胞筛选、培养等步骤。微血管内皮细胞净化后可用于许多相关的生物研究,如疾病相关的细胞分子机制研究和药物筛选。
(1)纯化方法可以通过以下方式实现:用尼龙网或不锈钢网筛过滤细胞悬液、物理刮除、根据生长特性选择、局部消化、差速粘附、免疫磁珠法等。
(2)生长特性分离法:根据内皮细胞的生长特性进行分离。即将附着在培养皿壁上的组织块。经过一段时间的培养,除了血细胞,其他细胞都没有离开组织块。此时,微血管内皮细胞首先游出,组织块立即移除,留下的大部分是血细胞和内皮细胞。经过1-2代的传代,血细胞自动消失,只留下微血管内皮细胞。这种方法避免了细胞的机械和化学损伤,不需要特殊设备,操作简单,可取。
(3)局部消化法:当目标细胞区域与其他细胞群之间有明显的边界时,可以将少量消化酶滴入目标细胞区域。经过一段时间的作用,消化液和细胞可以一起吸出,然后消化酶可以离心去除或停止消化,然后细胞可以接种到另一个培养板的孔中进行培养。和物理刮除一样,这种方法要求目标细胞数量大,与其他细胞有明确的边界。
(4)差速附着法:通过不同的附着力,内皮细胞比纤维细胞更牢固地附着在培养板上。胰酶可用于消化细胞,并在倒置显微镜下监测。当纤维细胞收缩、变圆并脱离培养板时,立即使用含有胎牛血清的培养基来停止消化过程。然后,轻轻吸收细胞液,这样大部分内皮细胞仍然可以保留在原来的培养板上。通过多次重复这个过程,基本上可以去除成纤维细胞。
鉴别微血管内皮细胞
到目前为止,还没有发现不同器官组织中的微血管内皮细胞具有特定的蛋白质或标记物。
确认微血管内皮细胞的方法:
根据器官和组织的起源,我们可以对其在形态、形状、生化和功能等方面的特点进行综合评价。
(2)微血管内皮细胞通常生长为单层,接触时会出现抑制现象,呈典型的铺路石状。Weibel-Palade小体可以在电子显微镜下观察到。
CD31表面表达(3)、CD34、凝血调节蛋白质,第一Ⅷ细胞可以摄取低密度脂蛋白,产生前列腺素,具有内吞功能,与植物血凝素结合,从而形成毛细血管样网络。
培养微血管内皮细胞的原则
根据微血管内皮细胞的生长特性,由于微血管内皮细胞的起源,培养过程中需要适用一些特殊条件,这些条件可能会有所不同。一般来说,基础培养基、胎牛血清、双抗、谷氨酰氨和内皮细胞生长因子将用于培养微血管内皮细胞。